Biotin-LC-Sulfo-NHS（磺基-NHS-LC-生物素）是一種水溶性胺反應(yīng)性生物素化試劑，具有以下核心特點和應(yīng)用：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成

• 生物素分子：作為標記基團，與親和素（Avidin）或鏈霉親和素（Streptavidin）結(jié)合，實現(xiàn)高親和力檢測與純化。

• 長鏈己酸基團（LC）：提供空間間隔臂（spacer arm），減少生物素與目標分子間的空間位阻，優(yōu)化標記效率。

• 磺化N-羥基琥珀酰亞胺酯基團（Sulfo-NHS）：賦予試劑水溶性，并使其在溫和條件下（pH 7.0-9.0）與伯胺基團（-NH?）發(fā)生特異性反應(yīng)，形成穩(wěn)定酰胺鍵。

二、物理化學(xué)性質(zhì)

• 外觀與溶解性：白色固體，溶于水及部分有機溶劑（如二甲基甲酰胺，DMF），生理緩沖液中溶解性優(yōu)異，無需額外添加有機溶劑。

• 反應(yīng)活性：

• 靶標：與含有伯胺基團的生物分子（如蛋白質(zhì)、抗體）反應(yīng)，尤其是賴氨酸殘基的ε-氨基或多肽的氨基末端。

• 條件：在pH 7.0-9.0的緩沖液中反應(yīng)，保持生物分子天然活性。

• 產(chǎn)物穩(wěn)定性：形成的酰胺鍵穩(wěn)定，適用于長期實驗存儲。

• 水溶性機制：磺酸鈉基團（-SO?Na）增強親水性，防止試劑穿透細胞膜，確保僅標記細胞表面蛋白。

三、核心應(yīng)用領(lǐng)域

1. 蛋白質(zhì)與抗體標記：

• 標記對象：抗體、重組蛋白、可溶性MHC/肽復(fù)合物等。

• 實驗技術(shù)：免疫印跡（Western blotting）、免疫組化（IHC-P）、免疫沉淀（IP）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、流式細胞術(shù)（FC）等。

• 優(yōu)勢：通過生物素-親和素系統(tǒng)實現(xiàn)目標分子的高效檢測、定位與純化。

2. 細胞表面蛋白特異性標記

• 機制：試劑無法穿透完整細胞膜，僅標記暴露于細胞表面的伯胺基團。

• 應(yīng)用場景：

• 研究受體與轉(zhuǎn)運蛋白的表達與調(diào)控。

• 分析極化上皮細胞中膜蛋白的分布。

• 結(jié)合熒光或酶標記技術(shù)，實現(xiàn)細胞表面分子的可視化與定量。

3. 蛋白質(zhì)組學(xué)研究：

• 功能：標記重組蛋白質(zhì)，便于通過親和層析（如鏈霉親和素磁珠）進行純化。

• 優(yōu)勢：提高蛋白質(zhì)純度，減少非特異性結(jié)合，適用于后續(xù)質(zhì)譜分析或功能研究。

四、操作優(yōu)勢

• 無有機溶劑需求：反應(yīng)可在純水相緩沖液中進行，簡化實驗流程。

• 高效標記：長鏈間隔臂減少空間位阻，提升標記效率。

• 細胞兼容性：非膜穿透性確保僅標記細胞表面分子，避免胞內(nèi)蛋白干擾。

五、儲存與使用注意事項

• 儲存條件：干燥、-20℃避光保存，防止受潮或降解。

• 操作規(guī)范：

• 取用時保持干燥，避免反復(fù)凍融。

• 嚴格按推薦濃度使用，過量可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合。

• 反應(yīng)后需通過透析或超濾去除未反應(yīng)試劑。

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