Biotin-PFP（生物素-五氟苯酯）是一種高活性生物素衍生物，它將生物素的高特異性親和識別能力與五氟苯酯（PFP）的強反應(yīng)活性相結(jié)合，成為生物分子偶聯(lián)、標記及純化中的重要工具試劑，廣泛應(yīng)用于生物化學、分子生物學及藥物研發(fā)領(lǐng)域。以下是對其核心特性的詳細闡述：

一、化學結(jié)構(gòu)與組成

• 生物素模塊：屬于維生素B族成員，與親和素、鏈霉親和素形成較強的非共價結(jié)合（解離常數(shù)Kd≈10?1? M），是后續(xù)靶向捕獲、檢測、純化的核心單元。

• 五氟苯酯模塊：含五個氟原子的高活性酯基團，強親電性使其能高效捕捉氨基（優(yōu)先伯胺）或羥基，在溫和條件下形成穩(wěn)定的酰胺鍵或酯鍵，是實現(xiàn)與生物分子共價偶聯(lián)的關(guān)鍵。

二、物理性質(zhì)

• 外觀：白色至淡黃色粉末。

• 熔點：190.0~194.0℃。

• 沸點：555.3±50.0℃（預(yù)測值）。

• 密度：1.441。

• 溶解性：通常需用無水有機溶劑（如DMF、DMSO）溶解，因其對水和氧氣較為敏感，易發(fā)生降解。

• 儲存條件：需在-20℃、避光、干燥的惰性氣體（如氬氣）保護下儲存，以保證其穩(wěn)定性和活性。

結(jié)構(gòu)式：

三、反應(yīng)特性

• 高反應(yīng)活性：PFP基團在溫和條件下（如pH 7-9、室溫至37℃）即可與生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸、多肽）的氨基或羥基快速反應(yīng)，形成穩(wěn)定的共價鍵。

• 反應(yīng)選擇性：優(yōu)先與伯胺反應(yīng)，生成酰胺鍵，適用于蛋白質(zhì)N端或賴氨酸側(cè)鏈的標記。

• 穩(wěn)定性：形成的生物素標記產(chǎn)物在多種緩沖液和儲存條件下（如-20℃）可長期保持活性。

四、應(yīng)用場景

• 蛋白質(zhì)修飾與標記：

• 用于蛋白質(zhì)的熒光標記、酶標記或親和純化。例如，通過PFP-Biotin標記抗體后，可利用鏈霉親和素磁珠進行免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。

• 結(jié)合生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)，實現(xiàn)蛋白質(zhì)復合物的富集與分析。

• 核酸標記：

• 修飾寡核苷酸或RNA，用于原位雜交（ISH）、熒光原位雜交（FISH）或核酸pull-down實驗。

• 作為高通量測序的接頭或探針的標記物，提高檢測靈敏度。

• 細胞表面標記與追蹤：

• 標記細胞表面受體或抗原，結(jié)合熒光標記的鏈霉親和素進行流式細胞術(shù)或顯微鏡觀察。

• 通過生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)實現(xiàn)細胞的長期追蹤和示蹤。

• 藥物靶點驗證：

• 標記藥物分子或探針，研究其與靶標的結(jié)合特性。

• 生物傳感器開發(fā)：

• 利用生物素-鏈霉親和素的高親和力，構(gòu)建高靈敏度的生物傳感器。

• 藥物遞送系統(tǒng)：

• 將生物素偶聯(lián)到藥物載體表面或納米顆粒上，通過親和素橋接實現(xiàn)靶向遞送或多功能載體構(gòu)建。

五、特點

• 高偶聯(lián)效率：PFP活性酯端可快速與氨基反應(yīng)，生成穩(wěn)定共價鍵。

• 特異性強：對氨基或羥基高度選擇性，減少副反應(yīng)。

• 生物素識別能力：與親和素結(jié)合力高，適用于多種免疫分析與檢測平臺。

• 多功能應(yīng)用：蛋白質(zhì)偶聯(lián)、抗體標記、藥物載體修飾及傳感器構(gòu)建。

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