Biotin-4-fluorescein（生物素-4-熒光素）是一種結(jié)合生物素（Biotin）與熒光素（Fluorescein）的生物共軛物，其分子式為 C??H??N?O?S，分子量為 644.69 g/mol，外觀呈橙色粉末狀，可溶于二甲基亞砜（DMSO）、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等有機(jī)溶劑。

一、核心特性

1. 雙功能標(biāo)記

• 生物素端：與親和素（如鏈霉親和素）結(jié)合力較強(qiáng)（結(jié)合常數(shù)Kd～10?1? M），可實(shí)現(xiàn)靶向捕獲或富集。

• 熒光素端：激發(fā)波長為 492 nm，發(fā)射波長為 518 nm，熒光信號(hào)強(qiáng)且穩(wěn)定，適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)等檢測技術(shù)。

2. 高靈敏度與特異性

• 與親和素結(jié)合時(shí)，熒光信號(hào)可被特異性淬滅（淬滅率達(dá) 84-88%），通過熒光恢復(fù)或強(qiáng)度變化實(shí)現(xiàn)定量檢測。

• 適用于復(fù)雜樣本中低豐度目標(biāo)的檢測，如細(xì)胞表面標(biāo)記物、稀疏核酸序列等。

3. 小分子優(yōu)勢(shì)

• 相比長鏈生物素衍生物，其分子尺寸更小，減少空間位阻，避免與親和素結(jié)合時(shí)的抗協(xié)同效應(yīng)，確保結(jié)合效率與穩(wěn)定性。

  
  

結(jié)構(gòu)式：

二、應(yīng)用方向

1. 分子生物學(xué)與生物化學(xué)

• 蛋白質(zhì)標(biāo)記：標(biāo)記目標(biāo)蛋白后，通過親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)純化、定位或相互作用研究。

• 核酸標(biāo)記：標(biāo)記DNA/RNA探針，用于熒光原位雜交（FISH）或?qū)崟r(shí)定量PCR（qPCR）。

• 細(xì)胞成像：追蹤細(xì)胞內(nèi)生物素化分子的動(dòng)態(tài)分布，如受體內(nèi)吞、囊泡運(yùn)輸?shù)取?/p>

2. 診斷與檢測

• 親和素/鏈霉親和素定量：通過熒光淬滅效應(yīng)，建立均相熒光檢測法，快速測定樣本中親和素濃度。

• 生物素衍生物檢測：作為標(biāo)準(zhǔn)品或探針，檢測生物素化分子（如生物素化抗體、藥物載體）的含量。

3. 藥物研發(fā)與納米技術(shù)

• 靶向遞送：修飾藥物載體（如脂質(zhì)體、納米顆粒）表面，通過生物素-親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)靶向釋放。

• 納米材料功能化：標(biāo)記納米顆粒后，利用熒光信號(hào)追蹤其體內(nèi)外行為，優(yōu)化設(shè)計(jì)參數(shù)。

三、使用注意事項(xiàng)

1. 儲(chǔ)存條件

• 短期保存：4℃冷藏，避光干燥。

• 長期保存：-20℃以下冰凍、干燥、避光，建議充入惰性氣體（如氬氣）保護(hù)，防止熒光素降解。

• 有效期：自接收日起 12個(gè)月內(nèi)使用，避免反復(fù)凍融。

2. 溶液配制

• 工作液制備：用無水DMSO、DMF或100%甲醇溶解，配制成 1 mM 濃儲(chǔ)液，分裝后冷凍保存。

• 稀釋使用：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，用緩沖液（如PBS）稀釋至工作濃度，避免直接稀釋濃儲(chǔ)液導(dǎo)致沉淀。

3. 實(shí)驗(yàn)操作

• 熒光檢測：使用黑色微孔板（減少背景干擾），設(shè)置激發(fā)波長 492 nm、發(fā)射波長 518 nm、截止波長 500 nm。

• 避免光漂白：檢測過程中盡量縮短光照時(shí)間，或使用抗淬滅封片劑。

• pH敏感：反應(yīng)體系pH應(yīng)控制在 6.5-7.5，過高或過低會(huì)影響生物素-親和素結(jié)合效率。

4. 安全提示

• 僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療。

• 操作時(shí)佩戴防護(hù)手套與護(hù)目鏡，避免直接接觸皮膚或吸入粉末。

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